Podľa štatistík WHO za posledných 40 rokov zomrelo na AIDS 25 miliónov ľudí. Škody spôsobené touto infekciou sú obrovské. Ukázalo sa, že väčšina nakazených je v Afrike, odkiaľ táto infekcia pochádza. Pri HIV je diagnostika ochorenia obzvlášť dôležitá. Je pravda, že zatiaľ neexistujú žiadne lieky na HIV, ale včasná liečba môže predĺžiť život pacienta a zlepšiť jeho kvalitu.
Diagnostika infekcie HIV
Infekcia HIV sa určuje v rôznych štádiách nasledujúcimi metódami:
- ELISA – enzýmový imunotest.
- Western blot.
- PCR – polymerázová reťazová reakcia.
- Rýchle testy.
Metódu PCR vyvinul americký biochemik Kary Mullis, ktorý za ňu v roku 1983 dostal Nobelovu cenu. Dnes je táto metóda v medicíne v diagnostike všetkých infekcií považovaná za vedúcu pre svoju presnosť a informačný obsah. HIV nie je v tomto smere výnimkou.
Podstata analýzy
Každá živá bunka obsahuje RNA a DNA. Tieto nukleové kyseliny sú schopné sebakopírovania a sebareplikácie. Pre každú infekciu sú fragmenty DNA jedinečné. ATv biologických tekutinách tieto fragmenty nukleových kyselín cirkulujú. Zachytáva a rozpoznáva ich špeciálne zariadenie – reaktor. Toto je základ metódy. Laborant počíta tieto fragmenty. Retrovírus HIV sa monitoruje na RNA. Dokonca aj pri jednotlivých kópiách vírusových častíc ich dokáže PCR odhaliť a spočítať.
Ako testovacia tekutina sa najčastejšie používa žilová krv. Špeciálne zložky metódy sa viažu na vírusové častice a robia ich detekovateľnými, pretože nájdené fragmenty sa znásobia.
V prípade HIV možno výsledok prítomnosti vírusu získať dlho predtým, ako sa objaví klinika. Preto má PCR vďaka svojej vysokej citlivosti takú vysokú diagnostickú hodnotu. Obrovským plusom PCR je všestrannosť metódy. Inkubačná doba infekcie pre PCR nie je prekážkou.
Náklady na výskum
Metóda PCR je pomerne drahá. To je jedna z jeho veľkých nevýhod. Vyžaduje si to najmodernejšie vybavenie a vysokokvalifikovaného laboratórneho asistenta. Vzhľadom na vyššie uvedené sa diagnostika PCR v malých osadách nevykonáva. Môžete sa nechať otestovať iba na špecializovaných veľkých klinikách.
Náklady na testovanie DNA HIV na moskovských klinikách začínajú od 2 800 rubľov, vírusová záťaž (vírusová RNA v plazme) sa určuje pomocou PCR - od 8 800 rubľov a odolnosť HIV voči inhibítorom proteáz - od 16 500 rubľov. Ako vidíte, ceny sú dosť vysoké. PCR sa môže vykonávať bezplatne na verejných klinikách v rámci politiky MHI. dôležité,že postup možno vykonať anonymne. V registri dostane pacient číslo, podľa ktorého sa dozvie výsledok. V moderných zdravotníckych centrách existujú osobné účty klientov, kde budú tieto údaje zadávané.
Ciele výskumu
V takýchto prípadoch je predpísaná PCR diagnostika pre HIV:
- Detekcia infekcie u dieťaťa narodeného chorej matke alebo nosičovi na určenie vnútromaternicovej infekcie.
- Ak ELISA poskytla pochybné výsledky (PCR na HIV pomáha v tomto prípade urobiť konečnú diagnózu).
- Na zistenie kvantitatívneho obsahu vírusu v tele.
- S pozitívnym imunoblotom sa navzájom dopĺňajú pomocou PCR.
- Testovanie darcov.
- Na včasnú diagnostiku HIV.
- Na určenie účinnosti a odolnosti voči ART.
Výhodou tejto analýzy je, že PCR na HIV možno vykonať aj u detí mladších ako jeden rok.
Výskum sa často nevykonáva na účely primárnej diagnózy, ale už v procese liečby. Primárnou diagnostikou sú sérologické štúdie (určujú hladinu protilátok proti HIV). Ak sa falošne pozitívny výsledok opakuje, môže to byť s nízkou vírusovou záťažou.
PCR diagnostikuje HIV, keď proti nemu ešte neexistujú protilátky. Metóda ELISA v tomto prípade neposkytne odpoveď.
A PCR na HIV už bude pozitívna. Ale príznaky tohto obdobia HIV sú nešpecifické. Pacient je najprv dlhodobo a neúspešne liečený na ARVI u praktického lekára. Treba mať na pamäti, že diagnóza HIV je založená len naPCR sa nedáva, je potrebné absolvovať ďalšie komplexné testy. Metóda PCR je častejšie pomocná pre zložité prípady.
Príprava na analýzu
Pred odberom PCR na HIV, 2 dni pred testom, by ste nemali jesť mastné jedlá, alkohol. Tiež je lepšie sa psychicky a fyzicky nenamáhať. Ak je pacientovi predpísaná imunostimulačná liečba, zastaví sa 2 týždne pred analýzou.
Krv sa najlepšie odoberá ráno. Vyšetriť sa dajú aj iné biologické tekutiny tela (spermie, pošvový sekrét), ale najlepším materiálom je krv. Sliny, pot, moč a slzy sa nepoužívajú, pretože obsah vírusu v nich je minimálny.
Plusy PCR pre HIV
Výhody metódy sú extrémne nízka pravdepodobnosť falošne pozitívneho výsledku, univerzálnosť reakcie pre akékoľvek biologické tekutiny tela. Analýza má široký rozsah:
- Jeden odber krvi možno použiť na zistenie rôznych infekcií.
- Technika je naliehavá, výsledok je hotový hneď na druhý deň.
- Dôvera je medzi 85 a 98 %.
- Prítomnosť HIV je možné určiť 10-14 dní po infekcii (momentálne zatiaľ neexistujú žiadne protilátky).
- Žiadny vekový limit, možno vykonať ihneď od narodenia.
Nevýhody metódy
Nevýhody PCR sú nasledovné:
- Náklady na analýzu.
- Vyžaduje sofistikované lekárske vybavenie.
- Vyžaduje vysokokvalifikovaného laboratórneho asistenta a lekára,analýza príjemcu.
- Reakcia je vysoko citlivá, takže chyba môže byť 20%.
- Môže viesť k falošne pozitívnemu výsledku, ak má pacient autoimunitné procesy, onkológiu, chronické infekcie.
- V laboratórnych priestoroch je potrebná špeciálna čistota, pretože vírus sa do analýzy môže dostať zo vzduchu. Potom bude výsledok nesprávny.
Pre laboratóriá, ktoré vykonávajú PCR, boli na zlepšenie kvality diagnostiky vyvinuté špeciálne prísne opatrenia podľa systému SanPiN pre vnútornú kontrolu. Okrem toho je potrebné dodržiavať všetky pravidlá práce s touto technikou:
- Povinné prísne dodržiavať informácie na skúmavkách.
- Pred odberom krvi sa znova pozrite a uistite sa, že je analýza naplánovaná.
- Sestra musí skúmavky správne označiť.
- Asistent laboratória musí správne vykonávať všetky manipulácie s biomateriálom, aby sa zabránilo krížovej kontaminácii.
- Testovací systém musí mať vynikajúcu kvalitu.
Len ak sú splnené všetky tieto podmienky, chyba v odpovedi môže byť len asi 2 % epizód.
Trvanie analýzy
Mnohých zaujíma, ako dlho bude pripravená PCR na HIV. Diagnóza netrvá dlhšie ako 8 hodín. Pacient môže dostať odpoveď už nasledujúci deň. Expresné testovanie sa vykoná do 2 hodín.
Spoľahlivosť PCR
Napriek mnohým výhodám sa PCR nepovažuje za ideálnu diagnostickú metódu. V prípade potreby je kontaktovanýpotrebu získať skríningové testy na prítomnosť HIV v tele.
Kedy sa odoberá krv na analýzu?
Ako dlho trvať PCR na HIV? Spoľahlivý výsledok možno získať už pri odbere krvi 4-4 dni po údajnej infekcii. Po 2 týždňoch bude spoľahlivosť na HIV 98% a po 5 dňoch - 80%. Prítomnosť negatívneho výsledku v PCR na HIV bude spoľahlivá, ale pre absolútne presný výsledok sa vykoná aj ELISA.
Analýza ELISA bude účinná iba vtedy, ak existujú protilátky proti vírusu, tento čas môže trvať 1-3 mesiace až šesť mesiacov. Keďže ELISA poskytuje vyššiu pravdepodobnosť (98 % -99,9 %), PCR nemožno nazvať 100 % potvrdzujúcim testom na prítomnosť infekcie HIV. Ale na druhej strane je to jediná technika, pri ktorej nemusíte čakať na objavenie sa protilátok.
Pri HIV môže PCR poskytnúť informácie o účinnosti ART, štádiu ochorenia HIV a počte VN (kvantitatívne hodnotenie prítomnosti HIV v tele). To bude hovoriť o závažnosti a rozsahu zmeny.
PCR testovanie na HIV je potrebné aj vtedy, ak sú v krvi protilátky, ale ich prítomnosť klinicky nenaznačuje spoľahlivosť HIV infekcie.
Sú testované nielen na infekciu a príležitostný sex. Iné príležitosti:
- Plánovanie tehotenstva.
- Nadchádzajúca operácia.
- Príležitostný sex.
- Niektoré profesie vyžadujú tento test na prijatie do práce (učitelia, lekári a ďalší zdravotnícky personál).
- Väzni.
- Pacienti s TBC.
- Zamestnanci ministerstva pre mimoriadne situácie a polície.
- Vrátili ste sa z dovolenky z exotických krajín (ak sa chcete uistiť, že tam nie je žiadna infekcia).
- Prostitútky.
- Zahraniční študenti.
- Drogy.
Tiež určité symptómy si u pacienta môžu vynútiť test na HIV:
- Náhla strata hmotnosti.
- Hnačka trvajúca viac ako 3 týždne
- Neprimerane vysoká teplota po dlhú dobu.
- Zdurené lymfatické uzliny.
- Nevysvetliteľná príčina zápalu pľúc, kandidózy atď.
Dešifrovanie analýzy je výsadou ošetrujúceho lekára, nie laboranta.
PCR alebo ELISA, čo je lepšie?
Keď sa diagnostika RNA vírusu HIV pomocou PCR zistí kvalitatívne aj kvantitatívne. Táto analýza jasne identifikuje špecifický patogén, aj keď existuje niekoľko krížovo reagujúcich patogénov. Biologický materiál možno použiť aj v sušenej forme. Nevýhodou je vysoká citlivosť PCR, kedy môže byť falošne pozitívny výsledok spôsobený prítomnosťou čo i len malého množstva cudzej DNA na prístrojoch alebo skúmavke.
Úlohou a možnosťou ELISA je určiť prítomnosť protilátok proti retrovírusu. Hoci jeho presnosť je 99 %, nie je použiteľná v počiatočných fázach.
Kvalitatívne testovanie na HIV
Vysokokvalitná PCR pre HIV určuje prítomnosť vírusu v tele. Výsledky v tomto prípade budú vyzerať takto: pozitívne, falošne pozitívne, negatívne. Táto štúdia však neposkytne informácie o množstve retrovírusu. Taká kvalitatívna analýzanevhodné, keď už bola infekcia HIV zistená v tele inými prostriedkami.
Je nemožné kontrolovať účinnosť liečby pomocou vysokokvalitnej PCR.
Kvantifikácia HIV
Vykonávané iba ľuďmi infikovanými vírusom HIV, aby bolo možné spočítať počet kópií vírusovej RNA v biologickom produkte.
Účelom takejto štúdie je monitorovať prebiehajúcu liečbu a identifikovať odolnosť vírusu voči nej. Antivírusová terapia v takýchto výpočtoch nie je slepo predpísaná lekárom, takže bude účinnejšia. Kvantitatívna PCR pre infekciu HIV sa robí oveľa častejšie. Táto analýza sa zobrazí ako kópia/ml krvi.
Aké výsledky možno poskytnúť:
- RNA vírusu chýba alebo je veľmi malá (asi 20 kópií/ml). Žiadna istota diagnózy.
- Od 20 – do 10 kópií až 6. stupňa/ml – diagnóza je spoľahlivá.
- Viac ako 106 kópií/ml – vysoké VN.
Laboratóriá môžu vykonávať PCR testovanie na HIV v reálnom čase. To znamená pozorovanie a numerické vyhodnotenie akumulácie produktov PCR s automatickým zaznamenávaním výsledkov.
