Hepatitída C je infekcia pečene spôsobená vírusom Flaviviridae HCV, ktorý pozostáva z jednej alebo viacerých molekúl RNA. Na stanovenie hepatitídy C u pacienta sa spravidla vykonáva séria diagnostických opatrení. PCR je analýza, ktorá presne potvrdí diagnózu. Záver často poskytujú lekári, keď už má pacient prvé príznaky choroby.
Čo je hepatitída C
Poškodenie pečene vírusovou infekciou prenášanou krvou alebo sexuálnym kontaktom sa v medicíne nazýva hepatitída C. Pôvodcom je vírus nebunkových infekčných agensov z čeľade Flaviviridae, ktorý obsahuje RNA. Infekcia môže zostať v tele dlhú dobu bez toho, aby sa prejavila. Preto sa hepatitída C (ako diagnóza) považuje za opodstatnenú iba vtedy, keď sa pomocou krvného testu s použitím PCR RNA RNA zistí mikroorganizmus.
Flavivírus sa nevytvára v umelo pestovaných izolovaných bunkách. V procese reprodukcie vytvára infekčný agens imunologicky odlišné modifikácie. Tieto faktory bránia telu dávaťprimeranú ochrannú reakciu a odborníci majú problém vyvinúť účinnú vakcínu.
Vírus sa prenáša parenterálne. Na infekciu sa musí dostať v dostatočnom množstve priamo do krvného obehu.
Aké testy sa robia na hepatitídu C
Vírusové patológie pečene sa diagnostikujú pomocou laboratórnych testov. Klinické štúdie hepatitídy C sa vykonávajú štúdiom cudzích a nebezpečných antigénov alebo proteínových zlúčenín (protilátok) v biomateriáli pacienta, najmä v krvi.
- Enzymatická imunoanalýza (ELISA). Metóda je založená na detekcii protilátok lgM v krvi. Imunoglobulín je považovaný za najväčší a je to pentamér. Prejavuje sa primárnou ochrannou odpoveďou lymfocytov na neznámu cudzorodú látku.
- Rádioimunoanalýza (RIA) - kvantitatívne stanovenie imunoglobulínu lgM pomocou značeného rádioaktívneho izotopu jódu.
- PCR hepatitídy C - stanovenie vírusovej RNA v biomateriáli (krvi). Táto analýza spoľahlivo potvrdí diagnózu.
Testovanie IgG nie je spoľahlivé. Jeho prítomnosť v krvnom sére môže naznačovať nielen prítomnosť flavivírusu, ale aj inú prekonanú infekciu, ktorá má rovnaký patogén.
Čo určuje analýzu PCR
Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je založená na identifikácii oblastí DNA špecifických pre určité patogény vo vzorkách materiálu na výskum (epitel, krv). Analýza umožňuje identifikovať patogénne najmenšie organizmy (vírusy) detekciou ich RNA alebo DNA v biologickom materiáli.
Laboratórny postup na detekciu protilátok Hepatitis C PCR sa vykonáva v 3 etapách:
- Vyberte. Študovaný biomateriál sa čistí od nečistôt a DNA sa získava v mobilnej fáze chromatografickej kolóny.
- Zosilnenie. Analýza sa vykonáva v cyklovači zariadenia-termostat. Ohrieva a ochladzuje skúmavky s určitou cyklickosťou. Pre jednu štúdiu sa vykoná až 35 cyklov. Výsledkom je dostatočný počet fragmentov DNA na detekciu, identifikáciu a vyhodnotenie patogénu.
- Elektroforéza. Výsledné fragmenty sa umiestnia do gélu s rôznou saturáciou agarózy a uskutoční sa elektroforéza. Výsledný elektroferogram sa analyzuje na počítači.
Používa sa nielen štandardná štúdia PCR, ale aj analýza PCR v reálnom čase. Toto je diagnostika v reálnom čase. Metóda umožňuje kvalitatívnu a kvantitatívnu analýzu, ktorá umožňuje identifikovať vznik a dynamiku ochorenia, ako aj predpísať terapiu zameranú na odstránenie príčiny pôvodu patológie. Real-time PCR sa používa aj na stanovenie čistej kultúry infekčných agens (genotypizácia).
Ako prebieha test polymerázovej reťazovej reakcie
Na diagnostiku možno použiť akúkoľvek ľudskú biologickú tekutinu. Biomateriál na testovanie na hepatitídu C je zvyčajne krv.
Odber vzoriek na diagnostiku sa vykonáva v rámci postupukancelária. Na odber krvi použite jednorazové skúmavky s látkou, ktorá inhibuje zrážanie krvi. Aktivity zamerané na prevenciu šírenia infekčných agens pomáhajú zabrániť vstupu ďalšieho kmeňa mikroorganizmov zvonku.
Krv na PCR hepatitídy C sa odoberá ráno nalačno. Vzorka sa okamžite odošle do laboratória. Biomateriál je povolené skladovať pri teplote +4 až +8 stupňov Celzia. Nádoby sú označené a vybavené návodom. Výsledky testov sú k dispozícii do 48 hodín, niekedy aj skôr.
Typy PCR
Rozsah použitia polymerázovej reťazovej reakcie je pomerne široký. Infekcionisti určujú pomocou PCR hepatitídu B, choroby prenášané hmyzom sajúcim krv, AIDS, tuberkulózu. V onkológii sa pomocou tejto metódy zisťujú nádorové bunky v ranom štádiu.
Existuje asi štrnásť typov analýz. Použitie jedného alebo druhého typu závisí od rozsahu a konečných výsledkov analýz. Niektoré typy PCR sú nevyhnutné, ak je výsledok potrebný do 20 minút.
Na diagnostiku hepatitídy C sa používajú 3 typy polymerázovej reťazovej reakcie:
- Kvalitatívne hodnotenie môže byť buď pozitívne, čo naznačuje prítomnosť infekcie v tele, alebo negatívne, čo naznačuje neprítomnosť flavivírusu.
- Real-time PCR (kvantitatívna analýza) – určuje kvantitatívnu RNA patogénu v IU/ml.
- Genotypizácia je analýza, ktorá odhaľuje typ (genotyp) vírusu.
Presnú identifikáciu a určenie choroby, po ktorej nasledujevšetky tri typy štúdií sa používajú na predpisovanie optimálnej terapie.
Kvalitatívna analýza polymerázovej reťazovej reakcie
Analýza je povinná pre každého, kto má test ELISA, ktorý odhalil protilátky proti HCV. Kvalitatívna PCR pre hepatitídu C je štandardným testom citlivosti. Metóda je zameraná iba na detekciu, nevykonáva sa žiadne počítanie ani izolácia iných látok.
Na detekciu protilátok sa používajú špeciálne testovacie systémy s prahom citlivosti najmenej 50 IU/ml. Ak sa zistia protilátky, predpíšu sa ďalšie objasňujúce testy. Ak je výsledok negatívny, ďalšie testovanie sa nevykoná.
V niektorých prípadoch môže byť falošne negatívny výsledok spôsobený nekompetentným personálom laboratória alebo nekvalitnými činidlami. Pre poistenie je lepšie vykonať analýzu inde.
Kvantitatívna PCR
Metóda sa používa na priame štúdium počtu flavivírusov v jednom reakčnom cykle. Na presné meranie sa používajú fragmenty DNA používané na hybridizáciu alebo fluorescenčne značené priméry. Existuje ekonomická možnosť detekcie pomocou zeleného farbiva SYBL. Farbivo je vklinené do malej drážky v DNA a po ožiarení laserom sa zmení na modrú.
Koncentrácia je určená prístrojom-zosilňovačom v digitálnom ekvivalente. Hodnoty sa môžu medzi laboratóriami mierne líšiť, a preto by sa mali porovnať s referenčnými hodnotami.
Kvantitatívna PCRhepatitída C pomáha zvoliť optimálne dávkovanie liekov a určiť trvanie liečby. Frekvencia štúdie závisí od štádia ochorenia, typu genotypu a predpísaného priebehu liečby.
Určenie genotypu
Vírus hepatitídy C má rôznu genetickú výbavu. Početné modifikácie znemožňujú vytvorenie vakcíny a tiež komplikujú terapiu. Celkovo bolo identifikovaných a zaznamenaných 11 genotypov a 100 podtypov. V krajinách bývalého ZSSR zisťuje PCR u osôb infikovaných hepatitídou C najmä genotypy 1b a 3.
V prítomnosti ktoréhokoľvek z genotypov môže cirhóza alebo rakovina pečene blázniť. Preto je také dôležité odhaliť vírus včas.
Pre niektorých pacientov sú niektoré lieky určené na boj proti HCV toxické. Genotypizácia vám umožňuje určiť typ proteínu a predpísať účinný liek.
Vo výsledkoch typizačných testov je číslo s malým latinským písmenom označujúce genotyp vírusu. Ak sa HCV deteguje, ale netypizuje, znamená to, že osoba má genotyp, ktorý nie je typický pre určitú geografickú oblasť.
Výsledky analýzy
Lekár sa zaoberá dešifrovaním výsledkov. Iba údaje z niekoľkých štúdií (spolu s anamnézou a vyšetrením) môžu poskytnúť celkový skutočný obraz o anamnéze.
- U zdravého človeka test na kvalitatívnu reakciu v biomateriáli nič nezistí. Ak je uvedená hodnota "detegovaná", infekcia je potvrdená a pacientpotrebuje ďalšiu diagnózu, po ktorej bude nasledovať liečba.
- Stanovenie počtu infekčných agens umožňuje posúdiť vírusovú záťaž v tele. Za normálnych okolností kvantitatívna PCR hepatitídy C nezistí patogén. Indikátor do 810^5 sa považuje za nízku záťaž a pri správnej terapii zaručuje priaznivý výsledok. Vyššie hodnoty si vyžadujú hĺbkové vyšetrenie a určenie dlhodobej terapie, za pozitívny výsledok nikto nemôže ručiť.
- Pozitívne výsledky genotypizácie naznačujú, ktorý genotyp je rozpoznaný. Negatívny výsledok naznačuje buď neprítomnosť flavivírusu alebo prítomnosť genotypu, ktorý nie je typický pre túto oblasť.
Čo znamená pozitívny test PCR
Akákoľvek vážna choroba si vyžaduje komplexnú diagnostiku. Pozitívna PCR na hepatitídu C potvrdzuje diagnózu, ale predpovede možno urobiť až po dodatočných laboratórnych a inštrumentálnych štúdiách.
Detekcia vírusu neposkytuje úplný obraz o patológii. Je potrebné identifikovať jeho typ a povahu, určiť, ako ovplyvňuje pečeň a iné orgány. Včasná detekcia HCV má často priaznivý terapeutický výsledok.
Negatívna PCR s pozitívnou ELISA
Pri pozorovaní symptómov charakteristických pre poškodenie pečene je vysoká pravdepodobnosť, že infekcia už prenikla do tela. Preto by ste mali kontaktovať hepatológa alebo špecialistu na infekčné ochorenia. Počas pohovorov odborník odoberie anamnézu a predpíše potrebné vyšetrenie.
Akvýsledky štúdií o hepatitíde C PCR sú negatívne a enzýmový imunotest je pozitívny, čo naznačuje prítomnosť protilátok proti flavivírusu v krvi. Stáva sa to väčšinou vtedy, keď sa infekcia dostane do tela v malom množstve, takže imunitný systém si s ňou poradil sám. Ale takíto ľudia sú stále považovaní za infikovaných a musia byť vyšetrení každých 6 mesiacov. Ak je s takýmito výsledkami testov odmietnutá bezplatná lekárska prehliadka osobe, je lepšie vykonať PCR za poplatok na udržanie zdravia a ak sú výsledky pozitívne, kontaktujte špecialistu na diagnostiku a liečbu.
Výhody a nevýhody metódy
Pri stanovení diagnózy hepatitídy C má PCR niekoľko výhod:
- Včasná detekcia patogénu.
- Presná definícia vírusu.
- Efektívnosť diagnostiky.
- Minimálna chybovosť.
- Vysoká citlivosť.
Nevýhody metódy:
- Vysoké náklady na analýzu. Test si vyžaduje drahé vybavenie, činidlá a vysokokvalifikovaný zdravotnícky personál. Všetko spolu predstavuje značné množstvo.
- Prísne požiadavky na prepravu biomateriálu.
Liečba zápalu pečene
PCR analýza na vírus hepatitídy C sa považuje za základnú diagnózu, ale nie za definitívnu. Aby bola terapia účinná, je potrebný rad ďalších laboratórnych a inštrumentálnych štúdií. Po prejdení všetkýchdiagnostické opatrenia, ktoré lekár predpisuje na liečbu:
- Je predpísaná diéta 5.
- Alkohol je úplne vylúčený.
- Spoločné užívanie interferónu a ribavirínu počas 25 dní.
- Kurzy hepaprotektorov "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- V špeciálnych prípadoch sa používa diskrétna plazmaferéza.
Lieky predpísané hepatológom sa používajú pravidelne, bez zmeny dávkovania. Dĺžku užívania liekov určuje lekár po absolvovaní kontrolných testov. Po ukončení liečebného cyklu musíte navštíviť lekára každých šesť mesiacov.
PCR-diagnostika umožňuje identifikovať pôvodcu hepatitídy C v počiatočnom štádiu. To prispieva k účinnosti terapie a prevencii prechodu choroby do takých nebezpečných foriem, ako je cirhóza a hepatocelulárny karcinóm.
